產品介紹
氰化溴化物活化的瓊脂糖是一種用乳糖穩定的凍干粉,可用于親和層析、蛋白層析、蛋白相互作用、抗體標記、抗體修飾以及將抗體附著于瓊脂糖珠上。偶聯方法(1) 液配制偶聯液:0.2M NaHCO0.5M NaCl,pH8.0:封閉液:0.1M Tris;pH8.5;清洗液D:0.1MZ酸乙酸鈉,0.5M NaCl,pH3.0;清洗液2:0.1M Tris-HCL,0.5M NaClpH8.0。必須盡量縮短清洗和偶聯之間的時間間隔,因此建議在偶聯前準備所有需要的溶液。緩沖液均需先過濾再使用。(2)蛋白預處理每毫升的介質可偶聯10~12mg的蛋白。干粉狀蛋白可用偶聯液溶解蛋白,液體狀蛋白需將其緩沖液置換為偶聯液。(3)清洗取適量丙酮保存的凝膠放在玻璃過波漏斗過波掉丙酮回收,用純水清洗4倍膠體積,再用4倍膠體積的偶聯液洗滌。(4)偶聯偶聯比(凝膠:偶聯樣品液)=1:2(:V)洗滌完成后,快速將清洗后抽干的凝膠加到蛋白溶液中,攬勻,pH調到8.3,于室溫振蕩反應2h,轉速70rpm。(5)封閉反應完成后收集偶聯樣品,可測偶聯樣品液中蛋白濃度(紫外吸收法),計算偶聯率。收集的偶聯樣品用超純水清洗兩遍,封閉液清洗一遍,再加入2倍膠體積的封閉液,室溫振蕩到閉1h,以消除轉余活性基團。(6) 清洗取封閉后的凝膠,用超純水清洗3遍,清洗液D、清洗液(2重紅清洗3遍,超純水清洗3遍,蛋白偶聯完成,該親和介質可使用。(7)保存20%的乙醇,4°C保存。