產品介紹

基 因 型MATa his3Δ1 leu2 met15Δ ura3-52簡 要 說 明 BY4741菌株來源于釀酒酵母原始菌株——S288C，是實驗室的常用菌株，為配子MATa型，廣泛應用于鈉，鉀離子平衡；細胞抗鹽；各種金屬離子的吸收；重金屬毒性；各種糖類，碳源對真核生物細胞生長的影響；過氧化物，超氧化物的吸收與運輸的研究中。BY4741釀酒酵母為組氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸 、尿嘧啶缺陷型菌株，可直接通過PEG/LiAc將pYES2質粒轉化進入BY4741細胞內。質粒pYES2的篩選標志為URA，可用SD-URA板板進行篩選。生物生產的BY4741感受態細胞經特殊工藝制作，-80℃可保存三個月，pYES2質粒檢測轉化效率>103 cfu/μg DNA。操 作 說 明1. 取100 µl冰上融化的BY4741感受態細胞，依次加入預冷的目的質粒1-3 µg，Carrier DNA (96℃水浴3 min，快速冰浴3 min，重復一次) 10 µl，PEG/LiAc 500 µl并吸打幾次混勻，30℃水浴30 min (15 min時翻轉6-8次混勻)。2. 將感受態移到42℃水浴15 min (7.5 min時翻轉6-8次混勻)。3. 5000 rpm離心 40 s棄上清，ddH2O 400 µl 重懸，離心 30s棄上清。4. ddH2O 50 µl重懸，涂板，29℃培養48-96 h注 意 事 項1. 感受態細胞最好在冰上融化。2. 若使用pYES2質粒表達蛋白，需在培養基中加入2%的半乳糖（篩選培養基中不用加半乳糖；當需要目的蛋白表達時，需加入半乳糖代替葡萄糖作為碳源），以誘導目的基因的表達。3. 轉化高濃度的質粒可相應減少最終用于涂板的菌量。4. 同時轉化2-3種質粒時可增加質粒的用量。5. 酵母為真核生物，不易長期保存，隨感受態在-80℃保存時間的延長，轉化效率會不斷下降，建議保存時間不超過90天。6. BY4741酵母菌株對高溫敏感，最適生長溫度為27-30℃；高于31℃，生長速度和轉化效率呈指數下降。7. 酵母在缺陷培養基中生長速度比YPDA培養基慢，培養基中缺陷成分越多，生長越慢，以轉化涂板為例：涂YPDA平板29℃，48 h培養可見直徑1 mm克隆；涂SD單缺平板29℃，48-60 h培養可見直徑1 mm克隆，涂SD雙缺平板29℃，60-80 h培養可見直徑1 mm克隆，涂SD三缺或四缺平板平板29℃，80-90h培養可見直徑1 mm克隆。

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