產(chǎn)品介紹

基 因 型MATα, ura3, his3, trp1, LexAop (x6)-LEU2簡 要 說 明EGY48菌株是Clontech公司開發(fā)的LexA 系統(tǒng)酵母雙雜實驗用菌株，MATa型，可直接轉(zhuǎn)化質(zhì)粒進行蛋白互作驗證或篩庫試驗；Transformation  marker為: his3, trp1, ura3，報告基因為：LEU2；報告基因UAS（上游激活序列）來源于LexA op(x6)，只有當Bait和Prey互作時才能啟動LEU2表達。EGY48-LexA酵母雙雜系統(tǒng)系統(tǒng)需要三種質(zhì)粒配套使用：pLexA、pB42AD、p8op-LacZ。質(zhì)粒pLexA的篩選標志為HIS3，用于表達DNA-BD(來自原核的202個氨基酸殘基組成的LexA蛋白)與目標蛋白(Bait)的融合蛋白；質(zhì)粒pB42AD的篩選標志為TRP1，用于表達AD(來自皰疹病毒的88個氨基酸殘基組成的B42AD蛋白)與目標蛋白（Prey）的融合蛋白；報告質(zhì)粒p8op-LacZ的篩選標志為URA3，報告基因為LacZ，報告基因UAS來源于LexA op(x8) ，只有當Bait和Prey互作時才能啟動LacZ表達。High5TM系列Y2HGold感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，-80℃可保存三個月，經(jīng)PGBKT7質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率>104cfu/μg DNA 。操 作 說 明1.取1管感受態(tài)細胞置冰上融化，6 000 rpm離心1min，去掉上清。2.加入320 μl LiTE/PEG溶液，重懸細胞，然后加入10μl Carrier DNA(95-100 度5min 快速冰浴，重復(fù)一次)，預(yù)冷目的質(zhì)粒2-5ug,體積不多于20ul。3.充分混勻，于30度250 rpm轉(zhuǎn)速下培養(yǎng)30 min。4.42度熱激2.5min。5.6000 rpm離心1min，去掉上清。6.加入1 ml TE溶液，溫和重懸細胞。7.6000 rpm離心1min，去掉上清。8.加入100 μl TE溶液，重懸細胞，將細胞涂布于相應(yīng)的營養(yǎng)缺陷型固體合成培養(yǎng)基。9.30度倒置培養(yǎng)48-96h，直至形成大小合適的酵母菌落。Preparation of Media：YPDA （1L）:Tryptone                20gyeast extract             10g 0.2% adenine            15ml補水到 950ml，  用鹽酸調(diào)PH到 6.5Agar                 20g (for plates only)121度，15分鐘高壓滅菌，待培養(yǎng)基溫度降到55度時，加入已過濾的40% 葡萄糖 50 ml0.2% adenine(1L)Adenine    2g補水 到1L，溶解后高壓滅菌或0.22um濾膜過濾除菌注 意 事 項1.感受態(tài)細胞最好在冰上融化。2.轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。3.同時轉(zhuǎn)化2-3種質(zhì)粒時可增加質(zhì)粒的用量。4.EGY48酵母菌株對高溫敏感，最適生長溫度為27-30℃；高于31℃，生長速度和轉(zhuǎn)化效率呈指數(shù)下降。5.酵母在缺陷培養(yǎng)基中生長速度比YPDA培養(yǎng)基慢，培養(yǎng)基中缺陷成分越多，生長越慢，以轉(zhuǎn)化涂板為例：涂YPDA平板29℃，48h培養(yǎng)可見直徑1mm克隆；涂SD單缺平板29℃，48-60h培養(yǎng)可見直徑1mm克隆，涂SD雙缺平板29℃，60-80h培養(yǎng)可見直徑1mm克隆，涂SD三缺或四缺平板平板29℃，80-90h培養(yǎng)可見直徑1mm克隆。

此產(chǎn)品需要干冰運輸發(fā)貨，會根據(jù)路途及包裝大小收取一定的干冰運費。