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基 因 型F- ompT hsdSB(rB- mB- ) gal dcm lacY1 (DE3)簡 要 說 明Tuner（DE3）菌株是BL21菌株的 lacZY基因（半乳糖苷透性酶基因）突變株，此突變導致IPTG以均一速度進入體系中大腸桿菌的每個細胞，產生更加嚴格、均一的濃度依賴。此菌株用于高效表達克隆于含有噬菌體T7啟動子的表達載體(如pET系列)的基因。λ噬菌體DE3區含有T7噬菌體RNA聚合酶，該區整合于Tuner的染色體上，所以稱為Tuner（DE3） ，可同時表達T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等質粒的蛋白表達。High5TM系列Tuner（DE3）感受態細胞由特殊工藝制作，經pUC19質粒檢測轉化效率達107cfu/μg。操 作 說 明1.取100μl冰上融化的Tuner（DE3）感受態細胞，加入目的質粒并輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。3.向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養基（2YT或LB），混勻后37℃，200rpm復蘇60分鐘。4.5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。5.將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。注 意 事 項1.感受態細胞最好在冰上融化。2.混入質粒時應輕柔操作3.轉化高濃度的質粒可相應減少最終用于涂板的菌量。4.誘導時，IPTG濃度可選（0.1-40mM均可）。5.為獲得需要量的蛋白，最佳誘導時間，溫度，IPTG濃度需實驗者優化。

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