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基 因 型F–ompT hsdSB (rB- mB-) gal dcm (DE3)pLysS CamR簡 要 說 明 OverExpress C43(DE3)、OverExpress C41(DE3)兩個菌株均起源于BL21(DE3)，其優點是可以高效表達毒性蛋白或疏水性蛋白。OverExpress C41(DE3)跟BL21(DE3)的區別在于其基因組含有至少一個未知突變，這個未知突變使其獲得了高效表達毒性蛋白的能力，此突變位點參與大腸桿菌表達毒性蛋白時的細胞死亡途徑；OverExpress C43(DE3)來源于OverExpress C41(DE3)，是通過篩選OverExpress C41(DE3)對另一個不同毒性蛋白的抗性菌株獲得。C43(DE3)菌株具有比C41(DE3)更強的表達毒性蛋白和疏水性蛋白的能力。將具有氯霉素抗性的pLysS質粒導入C43(DE3)細胞中即是C43(DE3) pLysS，pLysS表達T7溶菌酶，T7溶菌酶可以與T7 RNA聚合酶結合抑制其轉錄活性，進而降低目的基因的背景表達水平，但不干擾IPTG誘導的表達，非常適合毒性蛋白的原核表達。該菌株染色體整合了λ噬菌體DE3區 (DE3區含有T7噬菌體RNA聚合酶)，可同時表達T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等質粒的蛋白表達。C43(DE3)pLysS感受態細胞由特殊工藝制作，pUC19質粒檢測轉化效率可達1×108 cfu/μg DNA。操 作 說 明1. C43(DE3)pLysS感受態細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的質粒，并用手撥打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的 LB無菌培養液，37℃，200 rpm復蘇60分鐘。4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取50 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含34 µg/ml氯霉素及所選質粒篩選抗生素的LB培養基上。5. 將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。注 意 事 項1. 感受態細胞最好在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。2. 轉化高濃度的質?？上鄳獪p少最終用于涂板的菌量。3. 誘導時，IPTG濃度可選（0.1-2 mM均可）。4. 為獲得需要量的蛋白，最佳誘導時間，溫度，IPTG濃度需實驗者優化。5. C43(DE3)pLysS 菌株攜帶 pLysS質粒，除復蘇培養基為無抗生素外，其余所用培養基、培養液均應含有34 µg/ml氯霉素，以防質粒丟失。

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