產(chǎn)品介紹

基 因 型F -ompT hsdSB(rB-mB-) gal dcm lacY1 ahpC (DE3) gor522::Tn10 trxB (KanR,TetR) pLysS CamR簡 要 說 明 Origami B (DE3) pLysS菌株攜帶pLysS質(zhì)粒，具有氯霉素抗性。pLysS可表達T7溶菌酶（T7溶菌酶可以作用于大腸桿菌細胞壁上的肽聚糖溶解大腸桿菌，還可與T7 RNA聚合酶結合抑制其轉錄活性，進而降低目的基因的背景表達水平，但不干擾IPTG誘導的表達），適合表達毒性蛋白和非毒性蛋白。Origami B (DE3) pLysS菌株表達突變的硫氧還蛋白還原酶 (thioredoxin reductase) (trxB)和谷胱甘肽還原酶 (glutathione reductase) (gor)，這兩個酶是還原途徑的關鍵酶，突變后有利于形成正確折疊的含有二硫鍵的蛋白，增強蛋白的可溶性。 此外，該菌株染色體整合了λ噬菌體DE3區(qū) (DE3區(qū)含有T7噬菌體RNA聚合酶)，可同時表達T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等質(zhì)粒的蛋白表達，具有氯霉素、卡那霉素和四環(huán)素抗性，不能用于具有氯霉素，卡那霉素抗性質(zhì)粒的表達。Origami B (DE3) pLysS感受態(tài)細胞由特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測轉化效率達108 cfu/μg DNA 操 作 說 明1. Origami B (DE3) pLysS感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的質(zhì)粒，并用手撥打EP     管底混勻，冰中靜置25分鐘。2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。注 意 事 項1. 感受態(tài)細胞最好在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。2. 混入質(zhì)粒時應輕柔操作，轉化高濃度的質(zhì)粒可相應減少最終用于涂板的菌量。3. 誘導時，IPTG濃度可選（0.1-2 mM均可）。4. 為獲得需要量的蛋白，最佳誘導時間，溫度，IPTG濃度需實驗者優(yōu)化。5. 具有氯霉素，卡那霉素和四環(huán)素抗性，不能用于具有氯霉素，卡那霉素和四環(huán)素抗性質(zhì)粒的表達。

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