產品介紹

基 因 型F- ompT hsdSB(rB-mB-) gal dcm araB::T7RNAP-tetA簡 要 說 明High5TM系列BL21(AI) 感受態細胞是大腸桿菌B/r型菌株(E.coli B/r)，BL21(AI) 來源于BL21菌株，為膜外蛋白酶OMPT的缺陷型菌株。該酶的缺失能夠有效防止表達的異源目的蛋白在細菌體內的降解。使用L-阿拉伯糖誘導araBAD啟動子下游的蛋白表達。使用葡萄糖可以抑制araBAD啟動子下游的蛋白表達。BL21(AI) 感受態細胞適用于任何以T7啟動子為基礎的表達載體，能夠進行高水平的重組蛋白表達。因為菌株體內的T7 RNA聚合酶水平能夠進行有效調節，BL21(AI) 感受態細胞能夠有效表達對其他BL21細胞有毒或生長抑制的蛋白。從BL21(AI) 菌株中獲得目的重組蛋白產量，和其他BL21菌株產量相當。High5TM系列BL21(AI) 感受態細胞由特殊工藝制作經pUC19質粒檢測轉化效率高達108cfu/μg。 操 作 說 明1.取100μl冰上融化的BL21(AI)感受態細胞，加入目的質粒并輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。2.42℃水浴熱激90秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。3.向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養基（2YT或LB），混勻后37℃，200rpm復蘇60分鐘。4.5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含50 µg/ml四環素及所選質粒篩選抗生素的2YT 或LB培養基上。5.將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。注 意：1.Brian Caliendo (Voigt 實驗室)報道過pCP20質粒比較難于轉化到這個感受態細胞中，而pCP20轉化到其他菌株中都很正常，但是菌體原因未知。2.即使不加葡萄糖，BL21(AI) 細胞的araBAD啟動子下游的本底蛋白表達水平仍然很低，加入葡萄糖后能夠進一步的降低本底蛋白的表達水平。3.注 意 事 項1.感受態細胞最好在冰上融化。2.混入質粒時應輕柔操作。3.轉化高濃度的質粒可相應減少最終用于涂板的菌量。4.誘導時，IPTG濃度可選（0.1-2mM均可）。5.為獲得需要量的蛋白，最佳誘導時間，溫度，IPTG濃度需實驗者優化。建議選擇該菌株進行蛋白表達的條件如下：1.使用T7啟動子載體（高拷貝或者低拷貝都可以）進行蛋白表達。2.使用其他BL21進行蛋白表達時，觀察到明顯的細菌生長的抑制作用。3.表達一個已知的毒性蛋白。

此產品需要干冰運輸發貨，會根據路途及包裝大小收取一定的干冰運費。