產品介紹

BL21 是最早開發的用于原核表達的菌株，BL21（DE3）、Rosetta、OrigamiB(DE3) 等一系列原核表達菌株均來源于 BL21 菌株。該菌株主要用于非毒性蛋白的表達，不含 T7 RNA 聚合酶，所以不能用于由 T7 啟動子驅動的蛋白表達(如：pET 系列)；但含有大腸桿菌 RNA 聚合酶，可以用于 tac 或 trc 等使用大腸桿菌 RNA 聚合酶的原核系統的表達（如：pGEX，pMAL 質粒）。AngYuBio High5 TM 系列 BL21 電擊感受態細胞由特殊工藝制作，經 pUC19 質粒檢測轉化效率達 10 9 cfu/μg。

操作說明

1. 0.1cm 電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上 5 分鐘，待其瀝干水分，正置 5 分鐘，待乙醇揮發干凈立即插入冰中，壓實冰面，電極杯頂離冰面 0.5 cm 以方便蓋上杯蓋，冰中靜置 5 分鐘充分降溫。

2. 取-80℃保存的 BL21 電擊感受態細胞插入冰中 5 分鐘，待其融化，加入目的 DNA (質粒或連接產物)并用手撥打 EP 管底輕輕混勻，避免產生氣泡，立即插入冰中。

A. 測定轉化效率使用 1 μl 10 pg/μl 的對照質粒 pUC19；

B. 對鹽濃度較高的 DNA 溶液或反應體系請用乙醇沉淀 DNA 后加入適量 TE 緩沖液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重懸，然后與電擊感受態混合進行電擊轉化。

3. 用 200 μl 槍頭(用刀切除 0.5cm 槍尖)將感受態-DNA 混合物快速移到電擊杯中，避免產生氣泡，蓋上杯蓋。

4. 啟動電轉儀，設置參數：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV (此為 BioRad 電轉儀推薦參數，也可按所用電轉儀推薦的參數操作），將電擊杯快速放入電轉槽中，電擊完成快速插入冰中。

5. 2 分鐘后從冰中取出電擊杯，放室溫，加入 700 μl 不含抗生素的無菌 S.O.C. 培養基（室溫），用 1ml 槍吹吸電擊杯底部數次混勻后，轉移到 50 ml 離心管（BD Falcon 50 ml 錐形離心管等），向離心管中補加 S.O.C. 培養基至 10 ml。37℃，225 rpm 復蘇 60 分鐘。

6. 5000 rpm 離心一分鐘收菌，重懸后取 100-200 μl 涂布到含相應抗生素的 S.O.C 平板上（因菌量較大，若全部涂板請選用直徑 15cm 培養皿 2-5 個）。將平板倒置放于 37℃培養箱過夜培養 13-17 小時。

注意事項

1. 加入 DNA 時體積不應大于感受態體積的 1/10。

2. 電擊感受態細胞加入電擊杯應避免產生氣泡，氣泡會增加弧光放電風險。

3. 當 DNA 不純或存在鹽，乙醇，蛋白及緩沖液等污染時，轉化效率急劇下降。

4. 電擊杯里的離子可增加溶液的電導，增大在含有細胞和 DNA 的溶液中產生電流和弧光放電的風險。

5. 若轉化大質粒或想獲得較高轉化效率，推薦使用高純質粒提取試劑盒提取質粒。質粒增大一倍，轉化效率下降一個數量級。

6. 加入 DNA 濃度不能過高，最好不超過 100 ng/μl。過高濃度質粒會降低轉化效率，增加弧光放電的風險。

7. 混入質粒時應輕柔操作，吸取感受態細胞時避免用力過猛，以免剪切力過大損傷細胞膜，降低轉化效率。轉化高濃度的質粒或連接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。

8. 電擊感受態細胞最好保存在-80℃以下，高于-80℃超期儲存會導致轉化效率會下降。

此產品需要干冰運輸發貨，會根據路途及包裝大小收取一定的干冰運費。