產品介紹
一. 制備 Dil染色液
a.制備 DMF、DMSO 或乙醇儲備溶液:儲備溶液應在二甲基甲酰胺 (DMF)、二甲基亞砜 (DMSO 或乙醇 DMSO 中配制,濃度為 1-5 mM。溶劑DMF 優于乙醇。儲備溶液分裝冷凍至少 -20℃。不能反復凍融,盡量一個月內用完。
b. 制備工作溶液:將儲備溶液稀釋到合適的緩沖液如無血清培養基、HBSS 或 PBS 配制成 1 至 5 μM 的工作液。工作液需要現配現用。
二.染色
1) 懸浮細胞
a. 細胞懸液1000g 4℃離心3-5分鐘,棄上清,PBS洗2次,每次5分鐘。細胞密度為1×106/mL。
b. 加入1 mL Dil工作液,室溫孵育5-30分鐘。
c. 4℃,400g離心3-4分鐘,棄上清。用PBS洗滌2次,每次5分鐘。
d. 用無血清細胞培養基或PBS重懸細胞,熒光顯微鏡或流式細胞術觀察。
2)貼壁細胞
a.在無菌蓋玻片上培養貼壁細胞。
b.從培養基上取下蓋玻片并吸出多余的培養基。
c.加入100 μL工作液,輕搖使之完全覆蓋細胞,室溫孵育5-30分鐘。
d.用培養基洗兩次,每次5分鐘。通過熒光顯微鏡或流式細胞儀觀察。
此方法為熒光染色常用方案,僅供參考。